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如果你在检测贴壁细胞
作者:admin ?? 发布于:2019-05-10 22:34 ?? 文字:【】【】【

  若是你要利用同型对照,记得必然要选择与目标抗体不异量的同型抗体。例如你利用1ug CD4,那么就要利用1ug同型对照。

  布景荧光高(即非特同性染色较着)可能是多种要素形成,例如荧光素、抗体、标识表记标帜方式、仪器、其它试剂或数据阐发等。在此,我们对这些要素进行逐个解析,让大师可以或许充实领会布景荧光的来历,从而可以或许在尝试中针对性的去处理。

  要晓得,有些抗原表达在细胞概况、有些表达在胞浆、细胞器内、胞核,以至有些所有部位都表达。所以需要采用合适的方式学去检测。

  你是不是不断在用厂家保举的量做尝试?你可能需要进行抗体滴定找到最佳抗体用量。

  同型对照是为了协助确定目标抗体非特同性布景染色(针对Fc受体或胞内卵白连系)而设置的阳性对照。FMO(荧光扣从对照)相对来说在抗原表达弱、或者进行多色流式尝试的时候更适合,它能够反映你的抗体组合中其它通道荧光的渗漏,协助你选择准确的阳性群体。

  你是不是发觉PE荧光标识表记标帜的抗体比FITC的要好一些?由于分歧荧光素的亮度分歧,所以比力分歧荧光素标识表记标帜的同种抗体检测成果就会形成误导。若是你要比力分歧公司出的抗体质量,能够比力同种荧光素标识表记标帜的抗体。

  你尝试利用的缓冲液能否准确?例如Biolegend的FoxP3在他们自家的foxP3缓冲液中机能优良,但若是换了其它家的缓冲液,可能就检测不出来了。同样,其它厂家大多也是如斯。固定和破膜缓冲液也十分主要。

  串联染料对某些固定体例也很敏感,所以若是在固定后检测发觉布景荧光非常,那时也需要考虑能否因为固定剂惹起。

  若是阐发时不小心设门将死细胞/碎片圈进了,就可能会呈现一些假阳性。所以用PI或7-AAD以至一些更好的活性染料,可以或许很好的解除死细胞(关于活性染料,我们之前发过一篇相关文章:)。

  流式细胞术尝试成果中,除了信号弱和布景荧光高外,还会碰着其它各类各样的坚苦。

  避免从分歧公司采办同型和目标抗体,由于分歧的公司,其抗体荧光素:卵白(F:P)比例是分歧的。

  若是你利用的是串联染料,那么若是抗体保留不妥或者没有避光,那么就可能发生降解。鄙人图的例子中,左图是一般的PE-cy5检测成果,能

脚注信息
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